ВВЕДЕНИЕ 6
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 8
1 Обзор литературы 8
1.1 Вирусные заболевания яблони. Общая характеристика 8
1.1.1 Вирус хлоритической пятнистости яблони 10
1.1.2 Вирус бороздчатости ствола яблони 12
1.1.3 Вирус растрескивания ствола яблони 14
1.2 Строение генома вирусов ACLSV,ASGV,ASPV 15
1.3 Детекция вирусов яблони иммуноферментным анализом 17
2 Материалы и методы 18
2.1 Материалы исследования 18
2.2 Методы исследования 18
2.2.1 Детекция вирусов яблони ACLSV,ASGV,ASPV методом иммуноферментного анализа (DAS-ELISA) 18
2.2.2 Выделение тотальной РНК из зараженных листьев яблони, с помощью СТАВ буфера 18
2.2.3 Синтез кДНК путем обратной транскрипции и амплификация данной кДНК методом ПЦР 19
2.2.4 Клонирование ПЦР продуктов 21
2.2.5 Трансформация клеток E. coli плазмидной ДНК методом теплого шока 22
2.2.6 Выделение плазмидной ДНК из клеток E. coli 23
2.2.7 Определение нуклеотидной последовательности полученных клонов методом Сэнгера 24
3 Результаты и их обсуждение
3.1 Детекция вирусов в образцах листьев яблонь Казахстана методом иммуноферментного анализа (DAS-ELISA) 25
3.2 Выделение тотальной РНК из образцов листьев яблонь собранных в Казахстане 26
3.3 Клонирование амплифицированной кДНК капсидного белка вирусов яблони в вектор Bluescript II SK(+) 27
3.4 Секвенирование полученных клонов кДНК капсидных белков вирусов яблони ACLSV,ASGV, ASPV 31
ЗАКЛЮЧЕНИЕ 37
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ 38
ПРИЛОЖЕНИЕ 41